Gudang Materi

Kadar Hambat Minimum Amoxicylin

Tujuan penentuan kadar hambat minimum antibiotika adalah untuk mengetahui kadar minimal suatu antibiotika yang dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Dalam praktikum kali ini dicari kadar minimal antibiotik Amoxicylin terhadap kuman Staphylococcus aureus.

Teori Dasar Kadar Hambat Minimum

Penentuan kepekaan mikroba terhadap suatu antibiotika atau khemoterapeutik dipakai untuk menentukan pengobatan terbaik terhadap penyakit yang disebabkan oleh suatu mikroba tersebut pada manusia atau hewan.

Ada dua cara untuk menentukan kepekaan kuman:

1. Cara cakram (disc method)
2. Cara tabung (tube dilution method)

Adapun yang dipakai dalam percobaan kali ini adalah metode cara tabung (tube dilution method). Penentuan Konsentrasi Hambat Minimal (Minimal Inhibitory Concentration) cara tabung (tube dilution method) dilakukan dengan cara membuat suatu penetasan antibiotik di pembenihan cair, kemudian ditanami kuman yang akan diperiksa. Kepekaan yang relatif diukur dengan melihat konsentrasi antibiotik yang terendah dimana pertumbuhan kuman tidak tampak (KHM).

Contoh :
Tabung A : larutan kuman dalam larutan antibiotik 10% → jernih, kuman dalam tabung mati.
Tabung B : larutan kuman dalam larutan antibiotika 5% → keruh, kuman dalam tabung masih hidup.
Tabung C : larutan kuman dalam larutan antibiotika 1% → keruh, kuman dalam tabung masih hidup.
Dengan demikian dapat ditentukan Konsentrasi Hambat Minimal (KHM) antibotika tersebut adalah 5% yang merupakan konsentrasi obat terkecil yang dapat menghambat pertumbuhan kuman.

Prinsip Kadar Hambat Minimum

Pada suatu konsentrasi tertentu, antibiotika mempunyai efek menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Pertumbuhan mikroorganisme tersebut ditandai dengan adanya kekeruhan pada media yang digunakan. Pada kadar tertentu, dimana pertumbuhan mikroorganisme terhambat oleh jumlah antibiotik yang sesuai, tidak terjadi kekeruhan pada media.

Dengan metode pengenceran, dapat dilihat pada konsentrasi berapa antibiotik tersebut mempunyai efek menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Pengamatan dilakukan berdasarkan intensitas kekeruhan yang terjadi pada setiap tabung berisi media dan suspensi kuman dengan konsentrasi antibiotika yang berbeda setelah diinkubasi selama 18-24 jam.

Alat dan Bahan

Alat

* Tabung reaksi kecil sebanyak 16 buah
* Ose
* Pipet 3 buah
* Filter bakteri
* Labu ukur
* Spiritus
* Vortex
* Inkubator

Bahan

* Bakteri Staphylococcus aureus
* Kaldu nutrisi (NB)
* Amoxicillin
* Air suling steril (NaCl)
* Larutan buffer pospat pH 6-8

Cara kerja

Pembuatan inokulum

* Sediakan biakan kuman standar dalam kaldu nutrisi atau biakan pada agar miring pada 37°C selama 18-24 jam, buat inokulum dalam suspensi kuman standar sesuai dengan Mc.Farland III.
* Siapkan 4 tabung reaksi secara berderet dan diberi nomor 1, 2, 3, dan 4; yang masing masing diisi dengan NaCI fisiologis/air suling steril sebanyak 9 ml.
* Pada tabung pertama diisi suspensi kuman dengan menggunakan ose sesuai dengan Mc Farland III, kocok sampai homogen.
* Ambil 1 ml dari tabung pertama dan masukkan pada tabung kedua, kocok sampai homogen.

Ambil 1 ml dari tabung kedua, masukkan ke tabung ketiga, kocok sampai homogen. Kemudian ambil 1 ml dari tabung ketiga, masukkan ke tabling keempat, kocok sampai homogen. Dengan demikian akan diperoleh suspensi kuman dengan pengenceran 10 x, 100 X, 1000 X, dan 10,000 X, (setara dengan 106 kuman/ml).

Pembuatan larutan stok antibiotika

Timbang seksama 5 mg Antibiotika dan larutkan dalam labu takar 50 ml dengan pelarut yang cocok sehingga diperoleh konsentrasi 100 µg/ml, saring dengan filter bakteri. Buat seri pengenceran kelipatan dua sehingga diperoleh kadar sebagai berikut: 50 µg/ml; 25 µg/ml; 12,5 µg/ml; 6,25 µg/ml; 3,12 µg/ml; 1,56 µg/ml 0,78 µg/ml.

Penentuan Kadar Hambat Minimal

1. Siapkan 14 tabung reaksi ( untuk percobaan duplo), dan beri label nomor 1 sampai nomor 7. Siapkan juga 2 tabung, satu untuk kontrol media (KM), dan satu tabung lainnya untuk kontrol kuman (KK).
2. Pada deretan tabung nomor 1 sampai dengan nomor 7, berturut-turut masukkan larutan antibiotika hasil pengenceran bertingkat yaitu : 50 ug/ml; 25 ug/ml; 12,5 ug/ml; 6,25 ug/ml; 3,12 ug/ml; 1,56 ug/ml; dan 0,78 ug/ml, masing-masing sebanyak 0,5ml.
3. Tambahkan pada setiap tabung, sebanyak 0, 1 ml inokulum (106 kuman/ml).
4. Tambahkan 0, 4 ml larutan kaldu nutrien sehingga volume setiap tabung menjadi 1ml.
5. Pipet 1 ml kaldu nutrisi (Nutrien Broth) ke dalam tabung kontrol media (KM), dan 0, 9 ml kaldu nutrient (Nutrien Broth) ke dalam tabung kontrol kuman (KK), dan masukkan ke dalam tabung KK tersebut, 0,1 ml inokulum.
6. Ulangi percobaan 2 kali.
7. Eramkan pada inkubator 18-24 jam pada 370 C
8. Setelah 24 jam amati hasilnya.

Skema Kerja

Hasil Pengamatan

Hasil pengamatan dapat disajikan dalam tabel berikut :

Pembahasan

Kadar hambat minimal suatu antibiotika dapat melihat kadar terkecil dari suatu antibiotika yang dibutuhkan untuk menghambat pertumbuhan kuman. Antibiotic yang akan ditentukan dalam percobaan ini adalah Amoxycilin dan kuman yang digunakan dalam percobaan ini adalah Staphylococcus aureus.

Untuk menentukan kadar hambat minimal dari suatu antibiotika, tambahkan inokulum dengan konsentrasi yang sama pada media yang sebelumnya telah ditambahkan antibiotic dengan konsentrasi yang berbeda pada setiap tabung reaksi. Untuk membuat antibiotic dengan konsentrasi yang berbeda, kita gunakan metode pengenceran.

Setelah kita buat konsentrasi yang berbeda, pada konsentrasi tertentu antibiotik tersebut dapat menghambat pertumbuhan kuman. Pada saat timbul kekeruhan pada suatu konsentrasi, dapat kita nyatakan bahwa antibiotik dengan konsentrasi tersebut tidak dapat menghambat pertumbuhan kuman.

Kontrol media yang ada digunakan untuk menentukan tingkat kejernihan. Tabung reaksi yang medianya dapat menghambat pertumbuhan kuman akan menampakkan kejernihan yang sama dengan kontrol media. Jadi, jika kontrol media keruh berarti dalam pengerjaannya tidak aseptis.

Selain itu digunakan juga kontrol kuman sebagai pembanding tingkat kekeruhan. Dalam tabung reaksi ini kuman tumbuh tanpa ada hambatan. Dalam tabung reaksi ini tingkat kekeruhan paling tinggi.

sumber : http://pharzone.com/blog/50-mikrobiologi/109-penentuan-kadar-hambat-minimum.html

Baca Selengkapnya ..

Abu Nawas dan Taruhan Memantati Raja

Pada suatu sore ketika Abu Nawas ke warung teh kawan-kawannya sudah berada di situ. Mereka memang sengaja sedang menunggu Abu Nawas.

"Nah ini Abu Nawas datang." kata salah seorang dari mereka. "Ada apa?" kata Abu Nawas sambil memesan secangkir teh hangat.
"Kami tahu engkau selalu bisa melepaskan diri dari perangkap-perangkap yang dirancang Baginda Raja Harun Al Rasyid. Tetapi kami yakin kali ini engkau pasti dihukum Baginda Raja bila engkau berani melakukannya." kawan-kawan Abu Nawas membuka percakapan.
"Apa yang harus kutakutkan. Tidak ada sesuatu apapun yang perlu ditakuti kecuali kepada Allah Swt." kata Abu Nawas menentang.

Selama ini belum pernah ada seorang pun di negeri ini yang berani memantati Baginda Raja Harun Al Rasyid. Bukankah begitu hai Abu Nawas?" tanya kawan Abu Nawas.

"Tentu saja tidak ada yang berani melakukan hal itu karena itu adalah pelecehan yang amat berat hukumannya pasti dipancung." kata Abu Nawas memberitahu.
"Itulah yang ingin kami ketahui darimu. Beranikah engkau melakukannya?"
"Sudah kukatakan bahwa aku hanya takut kepada Allah Swt. saja. Sekarang apa taruhannya bila aku bersedia melakukannya?" Abu Nawas ganti bertanya.
"Seratus keping uang emas. Disamping itu Baginda harus tertawa tatkala engkau pantati." kata mereka. Abu Nawas pulang setelah menyanggupi tawaran yang amat berbahaya itu.

Kawan-kawan Abu Nawas tidak yakin Abu Nawas sanggup membuat Baginda Raja tertawa apalagi ketika dipantati. Kayaknya kali ini Abu Nawas harus berhadapan dengan algojo pemenggal kepala.
Minggu depan Baginda Raja Harun Al Rasyid akan mengadakan jamuan kenegaraan.

Para menteri, pegawai istana dan orang-orang dekat Baginda diundang, termasuk Abu Nawas. Abu Nawas merasa hari-hari berlalu dengan cepat karena ia harus menciptakan jalan keluar yang paling aman bagi keselamatan lehernya dari pedang algojo. Tetapi bagi kawan-kawan Abu Nawas hari-hari terasa amat panjang. Karena mereka tak sabar menunggu pertaruhan yang amat mendebarkan itu.

Persiapan-persiapan di halaman istana sudah dimulai. Baginda Raja menginginkan perjamuan nanti meriah karena Baginda juga mengundang raja-raja dari negeri sahabat.

Ketika hari yang dijanjikan tiba, semua tamu sudah datang kecuali Abu Nawas. Kawan-kawan Abu Nawas yang menyaksikan dari jauh merasa kecewa karena Abu Nawas tidak hadir. Namun temyata mereka keliru. Abu Nawas bukannya tidak datang tetapi terlambat sehingga Abu Nawas duduk di tempat yang paling
belakang.

Ceramah-ceramah yang mengesankan mulai disampaikan oleh para ahli pidato. Dan tibalah giliran Baginda Raja Harun Al Rasyid menyampaikan pidatonya. Seusai menyampaikan pidato Baginda melihat Abu Nawas duduk sendirian di tempat yang tidak ada karpetnya.

Karena merasa heran Baginda bertanya,
"Mengapa engkau tidak duduk di atas karpet?"
Paduka yang mulia, hamba haturkan terima kaslh atas perhatian Baginda. Hamba sudah merasa cukup bahagia duduk di sini." kata Abu Nawas.
"Wahai Abu Nawas, majulah dan duduklah di atas karpet nanti pakaianmu kotor karena duduk di atas tanah." Baginda Raja menyarankan. "Ampun Tuanku yang mulia, sebenarnya hamba ini sudah duduk di atas karpet."
Baginda bingung mendengar pengakuan Abu Nawas. Karena Baginda melihat sendiri Abu Nawas duduk di atas lantai. "Karpet yang mana yang engkau maksudkan wahai Abu Nawas?" tanya Baginda masih bingung.
"Karpet hamba sendiri Tuanku yang mulia. Sekarang hamba selalu membawa karpet ke manapun hamba pergi." Kata Abu Nawas seolah-olah menyimpan misteri.
"Tetapi sejak tadi aku belum melihat karpet yang engkau bawa." kata Baginda Raja bertambah bingung.
"Baiklah Baginda yang mulia, kalau memang ingin tahu maka dengan senang hati hamba akan menunjukkan kepada Paduka yang mulia." kata Abu Nawas sambil beringsut-ringsut ke depan. Setelah cukup dekat dengan Baginda, Abu Nawas berdiri kemudian menungging menunjukkan potongan karpet yang ditempelkan di bagian pantatnya. Abu Nawas kini seolah-olah memantati Baginda Raja Harun Al Rasyid. Melihat ada sepotong karpet menempel di pantat Abu Nawas, Baginda Raja tak bisa membendung tawa sehingga beliau
terpingkal-pingkal diikuti oleh para undangan.

Menyaksikan kejadian yang menggelikan itu kawan-kawan Abu Nawas merasa kagum. Mereka harus rela melepas seratus keping uang emas untuk Abu Nawas.

Baca Selengkapnya ..

Abu Nawas dan Pedagang Budak

Kadangkala untuk menunjukkan sesuatu kepada sang Raja, Abu Nawas tidak bisa hanya sekedar melaporkannya secara lisan. Raja harus mengetahuinya dengan mata kepala sendiri, bahwa masih banyak di antara rakyatnya yang hidup sengsara. Ada saja praktek jual beli budak.

Dengan tekad yang amat bulat Abu Nawas merencanakan menjual Baginda Raja. Karena menurut Abu Nawas hanya Baginda Raja yang paling patut untuk dijual. Bukankah selama ini Baginda Raja selalu miempermainkan dirinya dan menyengsarakan pikirannya? Maka sudah sepantasnyalah kalau sekarang giliran Abu Nawas mengerjai Baginda Raja.

Abu Nawas menghadap dan berkata kepada Baginda Raja Harun Al Rasyid.
"Ada sesuatu yang amat menarik yang akan hamba sampaikan hanya kepada Paduka yang mulia."

"Apa itu wahai Abu Nawas?" tanya Baginda langsung tertarik.
"Kalau begitu cepatlah ajak aku ke sana untuk menyaksikannya." kata Baginda Raja tanpa rasa curiga sedikit pun.
"Tetapi Baginda ... " kata Abu Nawas sengaja tidak melanjutkan kalimatnya.
"Tetapi apa?" tanya Baginda tidak sabar.
"Bila Baginda tidak menyamarsebagai rakyat biasa maka pasti nanti orang-orang akan banyak yang ikut menyaksikan benda ajaib itu." kata Abu Nawas.

Karena begitu besar keingintahuan Baginda Raja, maka beliau bersedia menyamar sebagai rakyat biasa seperti yang diusulkan Abu Nawas. Kemudian Abu Nawas dan Baginda Raja Harun Al Rasyid berangkat menuju ke sebuah hutan.

Setibanya di hutan Abu Nawas mengajak Baginda Raja mendekati sebuah pohon yang rindang dan memohon Baginda Raja menunggu di situ. Sementara itu Abu Nawas menemui seorang badui yang pekerjaannya menjuai budak. Abu Nawas mengajak pedagang budak itu untuk melihat calon budak yang akan dijual kepadanya dari jarak yang agak jauh.

Abu Nawas beralasan bahwa sebenarnya calon budak itu adalah teman dekatnya. Dari itu Abu Nawas tidak tega menjualnya di depan mata. Setelah pedagang budak itu memperhatikan dari kejauhan ia merasa cocok. Abu Nawas pun membuatkan surat kuasa yang menyatakan bahwa pedagang budak sekarang mempunyai hak penuh atas diri orang yang sedang duduk di bawah pohon rindang itu. Abu Nawas pergi begitu menerima beberapa keping uang emas dari pedagang budak itu.

Baginda Raja masih menunggu Abu Nawas di situ ketika pedagang budak menghampirinya. la belum tahu mengapa Abu Nawas belum juga menampakkan batang hidungnya. Baginda juga merasa heran mengapa ada orang lain di situ.

"Siapa engkau?" tanya Baginda Raja kepada pedagang budak.
"Aku adalah tuanmu sekarang." kata pedagang budak itu agak kasar.
Tentu saja pedagang budak itu tidak mengenali Baginda Raja Harun Al Rasyid dalam pakaian yang amat sederhana.
"Apa maksud perkataanmu tadi?" tanya Baginda Raja dengan wajah merah padam.
"Abu Nawas telah menjual engkau kepadaku dan inilah surat kuasa yang baru dibuatnya." kata pedagang budak dengan kasar.
"Abu Nawas menjual diriku kepadamu?" kata Baginda makin murka.
"Ya!" bentak pedagang budak.
"Tahukah engkau siapa aku ini sebenarnya?" tanya Baginda geram.
"Tidak dan itu tidak perlu." kata pedagang budak seenaknya. Lalu ia menyeret budak barunya ke belakang rumah. Sultan Harun Al Rasyid diberi parang dan diperintahkan untuk membelah kayu.

Begitu banyak tumpukan kayu di belakang rumah badui itu sehingga memandangnya saja Sultan Harun Al Rasyid sudah merasa ngeri, apalagi harus mengerjakannya.

"Ayo kerjakan!"
Sultan Harun Al Rasyid mencoba memegang kayu dan mencoba membelahnya, namun si badui melihat cara Sultan Harun Al Rasyid memegang parang merasa aneh.
"Kau ini bagaimana, bagian parang yang tumpul kau arahkan ke kayu, sungguh bodoh sekali !"
Sultan Harun Al Rasyid mencoba membalik parang hingga bagian yang tajam terarah ke kayu. I a mencoba membelah namun tetap saja pekerjaannya terasa aneh dan kaku bagi si badui.
"Oh, beginikah derita orang-orang miskin mencari sesuap nasi, harus bekerja keras lebih dahulu. Wah lama-lama aku tak tahan juga." gumam Sultan Harun Al Rasyid.
Si badui menatap Sultan Harun Al Rasyid dengan pandangan heran dan lama-lama menjadi marah. la merasa rugi barusan membeli budak yang bodoh.
"Hai badui! Cukup semua ini aku tak tahan."
"Kurang ajar kau budakku harus patuh kepadaku!" kata badui itu sembari memukul baginda. Tentu saja raja yang tak pernah disentuh orang ini menjerit keras saat dipukul kayu.
"Hai badui! Aku adalah rajamu, Sultan Harun Al Rasyid." kata Baginda sambil menunjukkan tanda kerajaannya.

Pedagang budak itu kaget dan mulai mengenal Baginda Raja. la pun langsung menjatuhkan diri sembari menyembah Baginda Raja. Baginda Raja mengampuni pedagang budak itu karena ia memang tidak tahu. Tetapi kepada Abu Nawas Baginda Raja amat murka dan gemas. Ingin rasanya beliau meremas-remas tubuh Abu Nawas seperti telur.

Baca Selengkapnya ..